本实验以乳酸为底物。用新鲜的动物肝脏或肌肉组织的粗制提取液，分别制成酶蛋白部分（用白陶土吸附除去辅酶Ⅰ）和辅酶部分（加热破坏酶蛋白），观察两者单独作用及共同作用的情况。实验中为了便于观察，用甲烯兰（美兰）作为受氢体，已知甲烯兰能从还原型黄酶接受氢而由蓝色变成白色（甲烯白）。所以本实验中根据溶液蓝色的消褪情况判断乳酸脱氢反应的发生。

　　实验器材

　　水浴锅；离心机；离心管；试管；研钵；剪刀；镊子；实验动物（小鼠、大鼠或兔）。

　　实验试剂

　　1．玻璃砂　充分洗净。

　　2．0．1MpH7．4磷酸缓冲液　称取Na2HPO411．92g，KH2PO42．18g，加水定容至1升。

　　3．白陶土　用于吸附辅酶Ⅰ。

　　4．0．5%KCN液　称取KCN　0．5g，加水溶解成100ml。

　　5．5%乳酸钠溶液　称取乳酸钠5g，加水溶解成100ml。

　　6．0．04%甲烯兰液　称取甲烯兰0．04g，加水溶解成100ml。

　　实验方法

　　1．分别制备酶蛋白提取液及辅酶Ⅰ提取液

　?。?）除去辅酶Ⅰ的酶蛋白提取液：取新鲜动物肝（或肌肉）组织3g，剪碎放研钵中加玻璃砂约0．5g，白陶土0．5g，加pH　7．4　0．1M磷酸缓冲液8ml，研成细粥状。移入离心管中，以2000rpm离心机离心5min，倾于另一试管中备用。

　?。?）辅酶Ⅰ提取液：取蒸馏水10ml于中试管中，加热煮沸。取新鲜的肝（或肌肉）组织3g，剪碎，放入沸水中，继续煮沸10min，为防止水分过多蒸发可加盖。稍冷后倾入乳钵中研细，移入离心管中放入离心机离心10min，取上清液备用。

　　2．取试管4只，标明管号，按下图表加样：

　　3．充分混匀，向各管徐徐加人液体石蜡5滴（避免与空气接触），静置试管架上或放37℃水浴15～30min，随时观察并记录各管褪色情况，分析结果。

　　注意事项：

　　1．KCN剧毒，注意安全。

　　2．乳酸脱氢生成的丙酮酸与KCN结合，防止可逆反应发生。

　　3．本实验中生成的甲烯白易被空气氧化又转变成甲烯兰，所以在加入液体石蜡后观察褪色时不宜振荡。

　　4.  离心机选择合适转数，使用注意安全。